心血管指標和臨床應用知識

什么是NACB關于心血管指標在冠狀動脈疾病應用的推薦指南?
NACB(美國臨床生化學會)是AACC下面的一個高級專家委員會,專門負責制定一些檢驗醫學應用準則(LMPGs)。關于心血管指標在冠狀動脈疾病應用的推薦指南是1999年該委員會制定出的第一個推薦指南。其關于cTn臨床應用建議的主要內容也是與國際臨床化學聯盟(IFCC)、歐洲心臟病學會(ESC)和美國心臟病學會(ACC)等知名學會所制定的建議(Recommendation)或導則(Guidelines)基本相一致。

NACB/IFCC/ESC/ACC關于cTn臨床應用的建議對檢測試劑有何要求?
對于cTn作為一個特異性心血管指標用于臨床對心肌梗死(MI)的診斷或急性冠脈綜合癥(ACS)的危險分層提出了對試劑的要求,如:檢測的靈敏度,不精密度的要求,抗體必須檢測cTn分子的穩定結構區域,沒有嗜異性抗體的干擾,對樣品沒有抗凝劑(尤其是肝素)的要求,Cut-off值設定在> 99%分位值,試劑在此值的不精密度<10%CV,檢測的周轉時間(TAT)要小于1個小時等。

心肌標志物如何在心肌細胞內分布和釋放的?
心肌標志物主要包括肌紅蛋白,CK-MB和肌鈣蛋白。根據這些蛋白質的尺寸大小和所處位置決定其釋放的時間。最小的肌紅蛋白存在于細胞質內,首先釋放。存在于核子和線粒體內的CK-MB隨后釋放。而存在于收縮器內結構蛋白-cTn要等細胞完全裂解后才會釋放,專家一致認為心肌細胞死亡后,cTn才釋放。

肌鈣蛋白復合物由哪些亞單位組成?
肌鈣蛋白復合物存在于所有類型的橫紋肌細胞中,由三種亞單位組成:I,T和C。其中只有I和T具有心肌特異性,所以可以作為心肌特異性的指標。肌鈣蛋白復合物扮演一個傳遞Ca信號引起肌肉收縮的角色。

外周血循環中肌鈣蛋白I主要以哪些形式存在?
在外周血循環中,cTnI可以有多種形式存在,很多是以復合物的形式存在,如二元TnI-TnC 復合物,TnI-TnT復合物,或三元TnI-TnT-TnC復合物,其中二元 TnI-TnC復合物為主要部分。另有少量以游離cTnI,游離cTnT,降解/氧化的cTnI或磷酸化/非磷酸化cTnI形式存在。

肌鈣蛋白-I的分子結構如何組成的?
肌鈣蛋白-I分子由200個氨基酸組成,其心肌特異性在N'端的1~32AA所提供。肌鈣蛋白-I的分子結構不是很穩定,在體內或體外會被蛋白水解酶所降解,常從C'端開始,甚至N'端,最穩定的部分在AA 30-110區段。整個分子結構中含有2個絲氨酸,在體內會被蛋白輔酶A所磷酸化。磷酸化后的cTnI分子結構會發生改變,影響抗原抗體的結合。另外。分子結構中的2個半胱氨酸,會被氧化降解,改變結構影響抗原抗體的結合。肌鈣蛋白分子表面帶強陽電荷,容易干擾Ab-Ag的結合。如,肝素,一個帶負電荷的分子,與cTn結合后干擾免疫檢測。

為什么抗體的選擇對肌鈣蛋白檢測的結果正確性十分重要?
由于肌鈣蛋白-I分子結構的不穩定性,所以在進行分析設計中對抗體識別位點的選擇就由為重要,直接影響到結果的準確性。抗體識別位置必須選擇在分子結構的穩定區域(30-110 AA);抗體針對所有的cTnI形式的識別(游離的,復合的IC, ITC…),實現等分子(Equimolarity)的檢測;抗體選擇位置不會出現磷酸化和氧化的干擾。

引起不同廠家生產的cTnI試劑所檢測結果不一致的原因是什么?
造成不同廠家生產的cTnI試劑所測結果不一致的主要原因包括:使用不同的標準品(可能引起2-20 倍差距);抗體的不同而出現的抗原識別位點的不同,如游離的和IC復合物的TnI或不同抗原位點的抗干擾能力,如:蛋白水解酶,磷酸化,氧化等影響和使用不同的樣品類型,如:血清,血漿(肝素或EDTA)。

如何去選擇和判定一個優秀的cTn檢測試劑?
一個優秀的cTn試劑應符合NACB/?FCC/ESC/ACC指南中所提及的對檢測試劑的要求,我們了解其相應的一些指標,如:<10%CV值與>99%分位值的比值,此值越接近1越好,是反映試劑靈敏度和精密度的一個綜合表現。試劑的抗干擾能力,如減少HAMA 效應,嗜異性抗體,RF和其它的分析干擾。降低對樣品類型的要求,如可以是血清,血漿(包括肝素抗凝)。樣品周轉時間(TAT)的要求是否到達<1小時,對檢測試劑來說就要考慮分析時間是否足夠短,可否使用不會引起干擾的抗凝血漿,檢測系統是否具有真正意義的急診功能等。

什么是分析靈敏度和功能靈敏度?
最低檢測濃度/極限(Minimal detectable concentration/limit, MDC/MDL)是反映最低可區別于零值的濃度,又稱分析靈敏度(Analytical sensitivity)。


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